Akt位点那么多,看看磷酸化抗体领导者CST怎么选

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  做磷酸化抗体试验时难免会有这样的困惑,对于常见的p-Akt(Thr308)和p-Akt(Ser473)位点,到底该选择哪个?关于这个问题,作为磷酸化抗体领导者的CST及CST中国(赛信通)科研团队可以助你一臂之力。

  

Akt位点那么多,看看磷酸化抗体领导者CST怎么选

 

  CST赛信通关于磷酸化抗体Autophagy Signaling信号通路图

  在分享来自CST及CST中国(赛信通)关于的答案之前,先来了解下Akt家族。Akt也被称为蛋白激酶B(proteinkinaseB,PKB),是一种分子量约为60kDa的丝/苏氨酸蛋白激酶,存在于哺乳动物中的三种同工型。AKT可分为3种亚型(AKT1、AKT2、AKT3或PKBα,PKBβ,PKBγ),3种亚型的功能各异,但也有重叠。AKT1广泛地分布在组织中,Akt2主要分布在肌肉和脂肪细胞中,而Akt3则在睾丸和大脑中表达。Akt调控多个生物过程,包括细胞存活、增殖、生长和糖原代谢,Akt信号通路与恶性肿瘤、糖尿病、类风湿关节炎等多种疾病的发生发展密切相关,越来越受到广泛的关注。

  许多生长因子、激素与细胞因子通过结合其同源受体酪氨酸激酶(RTK)、细胞因子受体或GPCR,以及通过触发脂质激酶PI3K的活化来激活Akt,从而在细胞质膜中生成PIP3。Akt通过其普列克底物蛋白同源(PH)结构域与PIP3相结合,导致Akt转位至细胞膜。通过双磷酸化机制,可以激活Akt。同样因为自身PH结构域而转位至细胞膜的PDK1,能够活化Akt的Thr308位点使Akt磷酸化,PDK2再对Akt的Ser473位点磷酸化才能最后导致其完全活化,也就是说羧基末端Ser473位点的二次磷酸化对于活性来说也是必要的,并由mTOR-rictor复合体mTORC2完成,活化的Akt引起下游磷酸化级联反应和靶蛋白之间的相互作用。

  

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  CST赛信通关于磷酸化抗体MAP Kinase Signaling信号通路图

  那么,CST及CST中国(赛信通)对于做磷酸化抗体时,磷酸化Akt位点的选择有什么样的建议?细胞许多生物学功能中,PI3K/Akt信号通路发挥重要的调控作用,在细胞内起抑制凋亡,促进增殖的作用。作为PI3K的下游蛋白,Akt主要有两个重要的磷酸化位点Thr308和Ser473。PI3K不能直接活化Akt,它是通过与细胞内含有PH结构域的信号蛋白Akt和磷脂酰肌醇依赖激酶1(phosohoinositide-dependentkinase1,PDK1)结合,诱导Akt到细胞膜上,然后催化Akt蛋白的Thr308位点发生磷酸化,从而部分激活Akt,但是Akt功能活性的充分发挥还需要Ser473的磷酸化。在许多细胞系(尤其是肿瘤细胞系)中,对Akt功能的抑制多是通过抑制PI3K的功能(如使用PI3K特异性抑制剂LY294002和Wortmannin)而实现的,以p-Akt(Ser473)表达含量的降低为主要指标。PTEN蛋白是PI3K/Akt信号通路的主要负调节蛋白,拮抗PI3K和Akt,使PIP3脱磷酸,通过抑制Akt磷酸化并使其去磷酸化,使得细胞中的Akt磷酸化水平降低,从而阻断PI3K/Akt信号通路,抑制细胞生长,促进细胞凋亡。

  

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  CST赛信通关于磷酸化抗体p53 Signaling信号通路图

  Thr308和Ser473两个位点的激酶可能不同,PDK1磷酸化Akt308,而mTOR激活Akt473,一些研究表明Thr308的磷酸化会促进Ser473的磷酸化,因为AKT激活的磷酸化顺序一般是先Thr磷酸化后Ser磷酸化,即Thr磷酸化后Akt一般都激活了。膜上的PDK1在AKt的Thr308位点将其磷酸化,导致Akt的部分激活。Ser473位点被mTORC2磷酸化,可激发Akt的完全的酶活性。在选择位点的时候,可以从作用的激酶来推测哪一个位点可能会发生变化,最直接的位点是检测Ser473,如果两者都检测的话那自然是比较好的。

  CST及CST中国(赛信通)还有一个做磷酸化抗体的建议,即看看这两个位点发生磷酸化修饰对生物学功能的影响。如果是做细胞凋亡、细胞周期、细胞骨架重组、癌症相关的话,Thr308和Ser473两个位点都可能参与其中;如果研究细胞分化,可能需要多关注下Ser473位点;和蛋白降解相关的一般是Ser473位点;在非小细胞肺癌的研究中,可能与Thr308位点的磷酸化高度相关。但是必须要注意的是,信号通路错综复杂,最好还是结合文献,来推测所需检测的磷酸化308位点。

  

Akt位点那么多,看看磷酸化抗体领导者CST怎么选

 

  CST赛信通关于磷酸化抗体Phosphoinositide Signaling信号通路图

  据悉,CST(Cell Signaling Technology)是一家由科学家创立的私营家族公司,CST中国(赛信通)是CST在中国建立的独资子公司,Jay Dong(董增军)为副总裁兼亚太地区总经理。CST被公认为细胞信号研究的金标准、最佳抗体、研究者的首选、PTM(蛋白翻译后修饰)的领导者、2018最高引用抗体品牌等。

  

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  CST赛信通关于磷酸化抗体Warburg Effect信号通路图

  CST提供最高品质的特色信号蛋白及磷酸化、甲基化、乙酰化、泛素化、SUMO化等翻译后修饰抗体,蛋白翻译后修饰筛选试剂盒及服务,还有偶联抗体,二抗,ChIP试剂盒,细胞因子,ELISA试剂盒,细胞检测试剂盒,蛋白实验配套试剂等,提供蛋白相关实验的一站式解决方案。


 

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